Evaluación de proteínas recombinantes PwCP4, PwCP7 y PwCP9 usando sueros de ratas Wistar infectadas experimentalmente con Paragonimus mexicanus

Abstract

La paragonimiasis es una enfermedad zoonótica parasitaria que se considera desatendida y subdiagnosticada en nuestro país. El ser humano puede infectarse a través del consumo de cangrejos de agua dulce crudos o insuficientemente cocidos. Desde 1976 se han reportado 27 casos en Costa Rica, generalmente fueron diagnosticados en niños (90 %) que vivían en zonas rurales (vertiente Atlántica y Pacífica), y estos niños presentaron en un 50 % de los casos enfermedad extrapulmonar. La aplicación de una prueba intradérmica en escolares de Talamanca en el año 1999 determinó un 23 % (23/100) de los niños con reacciones positivas a Paragonimus mexicanus. Otro estudio realizado en el 2015 estableció un alto consumo de cangrejo de agua dulce (21 %) en la población, y determinó un 12.7 % (44/347) de cangrejos de 67 % (8/12) sitios analizados como infectados con el parásito. Debido a que no existe prueba diagnóstica inmunológica para determinar la presencia de paragonimiasis extrapulmonar en la población humana de Costa Rica, el objetivo del presente estudio fue obtener y caracterizar diferentes proteínas recombinantes del parásito, para ser utilizadas como antígenos en una prueba inmunoenzimática. Se expresaron y purificaron diferentes cisteínas proteasas (CP) recombinantes de Paragonimus westermani (Pw), las cuales, posteriormente, se evaluaron mediante la técnica de immunoblot con sueros de ratas Wistar infectadas experimentalmente con P. mexicanus y ratas Wistar controles (no infectadas con P. mexicanus). Los tres antígenos recombinantes (PwCP4, PwCP7 y PwCP9) resultaron ser específicos, ya que reconocieron los anticuerpos presentes en el suero de ratas infectadas, no así en las ratas no infectadas. Se concluye, que estas proteínas parecen ser promisorias para ser utilizadas en el diagnóstico inmunológico de la parasitosis.

Paragonimiasis is a parasitic zoonotic disease that is considered neglected and underdiagnosed in our country. Humans can become infected through the consumption of crabs raw or insufficiently cooked freshwater. Since 1976, 27 cases have been reported in Costa Rica, were generally diagnosed in children (90%) who lived in rural areas (slope Atlantic and Pacific), and these children presented extrapulmonary disease in 50% of the cases. The application of an intradermal test in schoolchildren from Talamanca in 1999 determined a 23 % (23/100) of children with positive reactions to Paragonimus mexicanus. Another study carried out in 2015 established a high consumption of freshwater crab (21%) in the population, and determined a 12.7% (44/347) of crabs from 67% (8/12) sites analyzed as infected with the parasite. Due because there is no immunological diagnostic test to determine the presence of paragonimiasis extrapulmonary in the human population of Costa Rica, the objective of the present study was to obtain and characterize different recombinant proteins of the parasite, to be used as antigens in an enzyme immunoassay. Different cysteine ​​proteases (CP) were expressed and purified. recombinants of Paragonimus westermani (Pw), which were subsequently evaluated using the immunoblot technique with sera from Wistar rats experimentally infected with P. mexicanus and control Wistar rats (not infected with P. mexicanus). The three recombinant antigens (PwCP4, PwCP7 and PwCP9) turned out to be specific, since they recognized the antibodies present in the serum of infected rats, but not in uninfected rats. It is concluded that these proteins appear to be promising to be used in the immunological diagnosis of parasitosis.