Detección molecular de especies de Plasmodium y bacterias del complejo Mycobacterium tuberculosis en primates no humanos, en cautiverio, de Costa Rica

Abstract

Con el objetivo de determinar la presencia de especies de Plasmodium en primates no humanos mediante gota gruesa, reacción en cadena de la polimerasa multiplex semi anidado (SnM-PCR, por sus siglas en inglés) para diferenciación de especies y secuenciación, se analizaron 152 muestras sanguíneas de monos de trece centros de rescate de Costa Rica. En gota gruesa, se determinaron dos muestras con el parásito Plasmodium malariae, en el SnMPCR, un total de cinco (3.3%) muestras resultaron positivas a P. malariae, y una muestra fue secuenciada, confirmando los resultados obtenidos microscópicamente y mediante SnMPCR. La secuenciación y construcción de un árbol filogenético reveló que el parásito P. malariae/P. brasilianum (GenBank KU999995) encontrado en un mono congo (Alouatta palliata) es idéntico al reportado recientemente en cuatro casos en humanos que se produjeron en Costa Rica en los años 2012 – 2013. El parásito P. malariae/P. brasilianum fue encontrado en diferentes especies de primates no humanos en cautiverio y en diversas regiones del Sur de Costa Rica. La similitud de las secuencias de los parásitos encontrados en humanos y un mono sugiere, que estos últimos podrían estar actuando como reservorios de P.malariae/P. brasilianum, por lo que es importante incluirlos en los programas de control y erradicación. Con el objetivo de determinar la presencia de bacterias del complejo Mycobacterium tuberculosis mediante PCR, se analizaron un total de 138 hisopados bucales de primates no humanos de trece centros de rescate de Costa Rica. Ninguno de los animales analizados presentó sintomatología ni antecedentes sugestivos de enfermedad pulmonar al momento del muestreo. En el PCR, un total de cinco muestras mostraron banda de amplificación entre 600–800 pb, sin embargo, la secuenciación no logró confirmar que fuera material genético de micobacterias patógenas. Este trabajo constituye un primer registro de la probable ausencia de micobacterias patógenas en PNH, sin embargo, se recomienda no desatender la enfermedad en esta población.

In order to determine the presence of Plasmodium species in non-human primates by thick blot, semi-nested multiplex polymerase chain reaction (SnM-PCR) for species differentiation and sequencing, 152 blood samples from monkeys from thirteen rescue centers in Costa Rica were analyzed. In thick blot, two samples were determined with the Plasmodium malariae parasite, in SnMPCR, a total of five (3.3%) samples were positive for P. malariae, and one sample was sequenced, confirming the results obtained microscopically and by SnMPCR. Sequencing and construction of a phylogenetic tree revealed that the P. malariae/P. brasilianum parasite (GenBank KU999995) found in a Congolese monkey (Alouatta palliata) is identical to the one recently reported in four human cases that occurred in Costa Rica in 2012 - 2013. The P. malariae/P. brasilianum parasite was found in different species of non-human primates in captivity and in different regions of southern Costa Rica. The similarity of the parasite sequences found in humans and a monkey suggests that the latter could be acting as reservoirs of P. malariae/P. brasilianum, so it is important to include them in control and eradication programs. In order to determine the presence of bacteria of the Mycobacterium tuberculosis complex by PCR, a total of 138 buccal swabs of non-human primates from thirteen rescue centers in Costa Rica were analyzed. None of the animals analyzed presented symptoms or a history suggestive of pulmonary disease at the time of sampling. In PCR, a total of five samples showed an amplification band between 600-800 bp; however, sequencing failed to confirm that they were genetic material of pathogenic mycobacteria. This work constitutes a first record of the probable absence of pathogenic mycobacteria in HNP, however, it is recommended not to neglect the disease in this population.